摘要： 維生素B1又名硫胺素，在植物性食物中分布極廣，谷類種子表皮中含量更為豐富， 麥麩、酵母、米糠等均是維生素B1的良好來源。檢測其含量也有著許多的方法。其中熒光分光光度法是對熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法，它是維生素B1含量測定的一個比較常用的方法。
本文以測定食品中維生素B1（硫胺素）元素含量為例，依據(jù)GB/T5009. 84-2003《食品中硫胺素（維生素B1 ）的測定》，應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計對維生素B1含量進(jìn)行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便，線性良好是測定維生素B1含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 維生素B1硫胺素食品
?原理
硫胺素在堿性鐵氰化鉀溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外線照射下，噻嘧色素發(fā)出熒光。在給定的條件下，以及沒有其他熒光物質(zhì)干擾時，此熒光之強度與噻嘧色素量成正比，即與溶液中硫胺素量成正比。
?實驗條件
儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計
熒光石英比色皿
分析條件：
激發(fā)波長：365nm
發(fā)射波長：435nm
藥品：
正丁醇、無水硫酸鈉、淀粉酶、鹽酸、乙酸鈉、氯化鉀 、氫氧化鈉 、鐵氰化鉀 、乙酸 、硫胺素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（0.1mg/mL）等。
其它：
分析天平（0.0001g） 、容量瓶、鹽基交換柱（填充活 性人造沸石） 、三角瓶、移液管、具塞比色管、擦鏡紙、磁力攪拌器、pH計等。
樣品及標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備
樣品溶液的制備：
（1）樣品提取
（2）提取液凈化
（3）凈化液氧化 （避光暗環(huán)境）
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：
（1）硫胺素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（0.1mg/mL）：
精確稱取100mg經(jīng)氯化鈣干燥24小時的硫胺素，溶于0.01mol/L鹽酸中，稀釋至1000mL。(于冰箱中避光保存）。?
（2）硫胺素標(biāo)準(zhǔn)中間液（10μg/mL）：
取10mL硫胺素標(biāo)準(zhǔn)液，用0.01mol/L鹽酸稀釋至100mL于冰箱中避光保存。
（3）硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.1μg/mL）：
將硫胺素標(biāo)準(zhǔn)中間液用水稀釋用水稀釋至100倍，用時現(xiàn)配。
標(biāo)準(zhǔn)曲線待測液
（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液
將20mL硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.1μg/mL）加入交換柱以代替樣品提取液，即得到標(biāo)準(zhǔn)凈化液。(做三份)
（2）標(biāo)準(zhǔn)待測液
進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)凈化液的氧化過程，得到標(biāo)準(zhǔn)空白溶液A、標(biāo)準(zhǔn)溶液B（各三份，用作平行）。
? 計算公式
X——試樣中硫胺素含量，單位為毫克每百克（mg/100g）；
U——試樣熒光強度；
Ub——試樣空白熒光強度；
S——標(biāo)準(zhǔn)熒光強度 ；
Sb——標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強度；
c——硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V——用于凈化的硫胺素標(biāo)準(zhǔn)使用液體積，單位為毫升（mL）；
V1——試樣水解后定容之體積，單位為毫升（mL）；
V2——試樣用于凈化的提取液體積，單位為毫升（mL）；
m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；
? ——試樣含量由微克每克（μg/g）換算成毫克每百克（mg/100g）的系數(shù)
?測定結(jié)果
應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊，分別讀取待測溶液的熒光強度，根據(jù)計算公式得到樣品維生素B1 的含量。
?結(jié)論
采用熒光分光光度法測定維生素B1含量，操作簡單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。
由于維生素B1待測液遇光不穩(wěn)定， 因此實驗對儀器的功能要求高。港東F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置，從而避免了樣品被強光的直接照射，使整個實驗操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。
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Printed in CHINA, September 1, 2011
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